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    qPCR實驗結(jié)果分析基本步驟(二)

    發(fā)布時間: 2021-10-15  點擊次數(shù): 4570次

    閾值,我們在操作軟件時上下拉動的橫線,是決定Ct值的因素之一。


    閾值是熒光信號相對于基線有顯著增強(qiáng)的點,大多數(shù)儀器會根據(jù)基線平均信號,自動計算熒光信號的閾值水平,并設(shè)置一個比平均值高10倍的閾值。


    也就是說,當(dāng)基線被正確的設(shè)置了,閾值也能手動調(diào)整成正確值。

    qPCR實驗結(jié)果分析基本步驟(二)

    需要注意的是:


    1、讀取閾值相關(guān)的分析數(shù)據(jù)時,不能隨意改變閾值的設(shè)置。只有分析不同樣本,或相同樣本不同靶基因時,才能調(diào)整閾值。


    2、設(shè)置閾值線時,要在擴(kuò)增曲線的指數(shù)擴(kuò)增區(qū)域內(nèi)設(shè)置,不能在起始階段,也不能在熒光背景(基線)區(qū)域。


    3、每次改變閾值時,要查看標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率和R的平方有沒有改善。沒有使用標(biāo)準(zhǔn)曲線時,也可以計算3個復(fù)孔(相同條件擴(kuò)增的樣本)的標(biāo)準(zhǔn)偏差。好的閾值應(yīng)該要改善Ct值的表現(xiàn)。


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