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    細胞培養(yǎng)常見問題及解答(一)

    發(fā)布時間: 2021-12-09  點擊次數(shù): 1274次

    1. 如何選用特殊細胞系培養(yǎng)基?

     培養(yǎng)某一類型細胞沒有固定的培養(yǎng)條件。在MEM中培養(yǎng)的細胞,很可能在DMEM或M199中同樣很容易生長??傊?,首先選MEM做粘附細胞培養(yǎng)、RPMI-1640做懸浮細胞培養(yǎng)是一個好的開始。




    2. 何時須更換培養(yǎng)基?

    視細胞生長密度而定,或遵照細胞株基本數(shù)據(jù)上的更換時間,按時更換培養(yǎng)基即可。

     



    3. 可否使用與原先培養(yǎng)條件不同的培養(yǎng)基?  

    不能。每一細胞株均有其特定使用且已適應(yīng)的細胞培養(yǎng)基,若驟然使用和原先提供的培養(yǎng)條件不同的培養(yǎng)基,細胞大都無法立即適應(yīng),造成細胞無法存活。

     



    4. 可否使用與原先培養(yǎng)條件不同的血清種類?

    不能。血清是細胞培養(yǎng)上一個極為重要的營養(yǎng)來源,所以血清的種類和品質(zhì)對于細胞的生長會產(chǎn)生極大的影響。來自不同物種的血清,,在一些物質(zhì)或分子的量或內(nèi)容物上都有所不同,血清使用錯誤常會造成細胞無法存活。

     



    5. 何謂FBS, FCS, CS, HS ?

    FBS (fetal bovine serum) 和FCS (fetal calf serum) 是相同的意思,兩者都是指胎牛血清,乃錯誤的使用字眼,請不要再使用。CS (calf serum) 則是指小牛血清。HS (horseserum) 則是指馬血清。

     



    6. 培養(yǎng)細胞時應(yīng)使用5% 或10% CO2?或根本沒有影響?



    一般培養(yǎng)基中大都使用HCO3-/CO3 2-/H+ 作為pH 的緩沖系統(tǒng),而培養(yǎng)基中NaHCO3 的含量將決定細胞培養(yǎng)時應(yīng)使用的CO2 濃度。當(dāng)培養(yǎng)基中NaHCO3 含量為每公升3.7 g 時,細胞培養(yǎng)時應(yīng)使用10% CO2;當(dāng)培養(yǎng)基中NaHCO3 為每公升1.5 g 時,則應(yīng)使用5% CO2 培養(yǎng)細胞。

     



    7.Hank's 平衡鹽溶液(HBS)要在空氣中使用,不需要CO2培養(yǎng)箱。原因是什么?Hank's 平衡鹽溶液(HBS)和Earle's平衡鹽溶液(EBS)有什么本質(zhì)的功能差別?

    HBS和EBS 的主要差別在于碳酸氫鈉的水平,在Eagles (2.2 g/L)中比在Hanks (0.35 g/L) 中高。碳酸氫鈉需用高水平的CO2平衡,以維持溶液的PH值。Eagles液在空氣水平的CO2 中,溶液會變堿,Hanks液在CO2培養(yǎng)箱中會變酸。如果希望在CO2培養(yǎng)箱中保存組織,需要用Eagles液,如果僅僅是清洗將要在細胞培養(yǎng)基中儲存的組織,用Hanks液就可以了。

     



    8. 什么是細胞的接種密度?

    依照細胞株基本數(shù)據(jù)上的接種密度或稀釋分盤的比例接種即可。細胞數(shù)太少或稀釋的太多亦是造成細胞無法生長之一重要原因。

     



    9. 懸浮性細胞應(yīng)如何繼代處理?



    一般僅需持續(xù)加入新鮮培養(yǎng)基于原培養(yǎng)角瓶中,稀釋細胞濃度即可,若培養(yǎng)液太多時,可將培養(yǎng)角瓶口端稍微抬高,直到無法容納為止。分瓶時取出一部份含細胞的培養(yǎng)液至另一新的培養(yǎng)角瓶,加入新鮮培養(yǎng)基稀釋至適當(dāng)濃度,重復(fù)前述步驟即可。

     



    10. 冷凍管應(yīng)如何解凍? 

    取出冷凍管后,須立即放入37℃水槽中快速解凍,輕搖冷凍管使其在1 分鐘內(nèi)全部融化,并注意水面不可超過冷凍管蓋沿,否則易發(fā)生污染情形。另冷凍管由液氮桶中取出解凍時,必須注意安全,預(yù)防冷凍管之爆裂。

     



    11. 細胞冷凍管解凍培養(yǎng)時, 是否應(yīng)馬上去除DMSO?

    除少數(shù)特別注明對DMSO 敏感的細胞外,絕大部分細胞株(包括懸浮性細胞),在解凍之后,應(yīng)直接放入含有10-15 ml新鮮培養(yǎng)基的培養(yǎng)角瓶中,待隔天再置換新鮮培養(yǎng)基以去除DMSO 即可,如此可避免大部分解凍后細胞無法生長或貼附的問題。


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