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哺乳動(dòng)物中制備基因組 DNA 實(shí)驗(yàn)
發(fā)布時(shí)間: 2021-12-14 點(diǎn)擊次數(shù): 843次材料與儀器
動(dòng)物組織
PBS 乙酸銨 乙醇 酚 氯仿 異戊醇 TE
離心機(jī) 搖床 研缽步驟
1. 切下組織并立即剪成小塊,置于液氮中凍結(jié)。2. 將200 mg~1 g 的組織用預(yù)冷的研缽和研杵研碎,或用錘子將其搗為細(xì)粉末,每100 mg 組織用1. 2 ml 消化緩沖液懸浮。
3. 500 g 離心細(xì)胞5 min,棄上請。貼壁生長細(xì)胞先用胰酶消化。
4. 細(xì)胞用1~10 ml 冰冷的PBS重懸,500 g 離心5 min,棄上清,重復(fù)1次。
5. 用1體積 的消化緩沖液重懸細(xì)胞。6. 將樣品在蓋緊的管中于50℃搖蕩下溫育12~18 h。7. 用等體積的酚/氯仿/異戊酵抽提樣品,1 700 g 離心10 min。
8. 如果樣品溶解得不好, 再加1體積不含蛋白酹K的消化緩沖液,并重復(fù)離心。
9 如果在界面上有一層厚的白色物質(zhì),重復(fù)有機(jī)抽提,將上層(水溶液)轉(zhuǎn)移至一個(gè)新管中。10. 加入1/2體積7.5 ml 乙酸銨和2體積100%乙醉,1 700 g 離心2 min。11. 用70%乙酵洗滌,晾干,沉淀用TE。
12. 緩沖液重新溶解,使終濃度在約1 mg/ml 左右。注意事項(xiàng)
1. 如果是用肝組織,要除去膽囊,因其含有高水平的各種消化酶。
以上就是本期的內(nèi)容,更多資訊,歡迎關(guān)注安培生物科技有限公司了解更多技術(shù)與產(chǎn)品資訊。
安培生物科技有限公司介紹:
安培生物堅(jiān)持為生命科學(xué)研究、活體動(dòng)物轉(zhuǎn)染、大規(guī)模生物生產(chǎn)、基因和細(xì)胞治療領(lǐng)域客戶,提供*細(xì)胞體內(nèi)可代謝的核酸轉(zhuǎn)染試劑;inviCELL™Platelet lysate無動(dòng)物血清產(chǎn)品旨在支持廣泛的細(xì)胞擴(kuò)增和生產(chǎn),包括培養(yǎng)間充質(zhì)干細(xì)胞和多種免疫細(xì)胞系等,為制藥公司或者生物技術(shù)公司提供無血清細(xì)胞培養(yǎng)規(guī)模生產(chǎn)服務(wù);提供以植物生物為平臺基因序列全人源化、*的細(xì)胞培養(yǎng)可分解3D基質(zhì)膠產(chǎn)品;提供內(nèi)毒素≦ 1.0 EU/mL、對細(xì)胞無毒性影響、高純度的一型膠原蛋白產(chǎn)品。安培生物專注為生物醫(yī)藥領(lǐng)域提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品和技術(shù)服務(wù),努力發(fā)展為基因治療、細(xì)胞治療的生物科技企業(yè)。
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