單層生長(zhǎng)的細(xì)胞增殖，融合成片，并長(zhǎng)滿細(xì)胞瓶表面。有些細(xì)胞靠頻繁地?fù)Q液可維持細(xì)胞在平臺(tái)期數(shù)天至數(shù)周；而許多其他細(xì)胞系需要胰蛋白酶處理、傳代培養(yǎng)后才能存活下來(lái)，用胰蛋酶處理可將細(xì)胞從生長(zhǎng)物表面分離下來(lái)以促進(jìn)傳代培養(yǎng)。后種細(xì)胞系不易呈現(xiàn)出接觸抑制并繼續(xù)增殖，達(dá)到極限后細(xì)胞則從細(xì)胞瓶表面脫落, 很難再?gòu)浬⒔臃N。

1) 下列步驟描述胰蛋白酶處理細(xì)胞的過(guò)程（見(jiàn)下文“胰蛋白酶處理分離細(xì)胞"）

2) 重懸細(xì)胞于培養(yǎng)液中。

在此時(shí)進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)嚴(yán)好。若記錄傳代次數(shù)以識(shí)別細(xì)胞的生長(zhǎng)經(jīng)歷，可按方便傳代計(jì)劃的比例稀釋細(xì)胞

3) 分裝細(xì)胞懸液于含有合適 PH 的培養(yǎng)液的細(xì)胞培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中。

傳代細(xì)胞在貼壁和再次進(jìn)行代謝前的大約幾小時(shí)中不能自行調(diào)節(jié) PH。傳代期是特別重要的時(shí)期.

培養(yǎng)液的 pH 和細(xì)胞培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿氣相中的 CO2 含量應(yīng)在接種細(xì)胞前平衡好。在細(xì)胞加人前將培養(yǎng)液加入培養(yǎng)瓶中，并將蓋子松松地蓋上，置培養(yǎng)箱中放罝 10~15 分鐘即可。

4) 在接受細(xì)胞的細(xì)胞培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中混勻細(xì)胞，將細(xì)胞懸液均勻鋪在容器表面、細(xì)胞貼壁通常笫 8~10 小時(shí)，人二倍體成纖維細(xì)胞經(jīng)常按以 1:4 比例，一周傳代一次。細(xì)胞倍增時(shí)間的估算可采用以下方法：即滿版細(xì)胞 1:2 比例傳代后再次鋪滿培養(yǎng)瓶的時(shí)間，或以 1:4 比例傳代兩次細(xì)胞倍增時(shí)間后細(xì)胞再次鋪滿。